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重组SspI限制性内切酶


重组SspI限制性内切酶是通过基因工程重组技术,可在 5~15 min 内精确完成 DNA 切割的快速限制性内切酶,可识别AAT^ATT位点,适用于快速切割质粒 DNA、PCR 产物、基因组 DNA 等。限制性内切酶系列产品共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系, 另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。此外,上海惠诚生物提供的去磷酸化、连接试剂在酶切Buffer中具有100%活性,支持一管化反应,提升“酶切-修饰-连接”的体验。

Color Buffer包括红色和黄色示踪染料,可将产物直接用于凝胶电泳。Color Buffer 的红色染料与 2500 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近;黄色染料与 10 bp 双链 DNA 片段在 1% 琼脂糖凝胶中迁移速率接近。


Cat.No.: E15576S

产品名称:

重组SspI限制性内切酶


英文名称:

SspI


产品组成:

组分规格
SspI60 µl
10×酶切Buffer1 ml
10× Color Buffer1 ml


识别位点:

5'...A A T ↓ A T T...3'
3'...T T A ↑ T A A...5'


建议反应条件: 

1× 酶切Buffe; 37℃温育。


最适反应温度:

37℃


失活条件:

80℃ 温育 20 min。


反应时间:

可在 5~15 min 内完成反应


保存条件:

-20 ℃保存


用途:

质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。


使用方法:

DNA 快速酶切流程 

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:

image.png

a. 本体系适用于经过纯化的 PCR 产物酶切。未纯化的 PCR 产物具备一定的离子强度,10×Buffer 加入量可适当减少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同时具有 外切酶活性,会影响酶切产物,因此如下一步需进行克隆等操作,建议酶切前对 PCR 产物进行纯化。 

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴; 

③ 37℃温育 15 min(质粒),或 15~30 min(PCR 产物),或 30~60 min(基因组 DNA); 

④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应(可选)。

2. 双酶切或多酶切 

① 每种快速内切酶的用量为 1 μl,并根据需要适当扩大反应体系; 

② 所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10; 

③ 如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切 反应。 

3. 适用于质粒的扩大反应体系

image.png

不同 DNA 中的酶切位点数量:

WXA0J98BQJVQVLBDV(6%}0Z.png

甲基化修饰影响:

}%2P@Z(OM6K8X~W85Q_NRF9.png

在不同反应缓冲液中的活性:

image.png

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