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BsmBI属于Type IIs型内切酶中的一种,可识别非回文序列,并在识别序列之外进行切割,可识别CGTCTC(N)₁^,常用于Golden Gate组装。经过优化的反应Buffer使BsmBI最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
Cat.No.: E22507S
产品名称:
重组BsmBI限制性内切酶
英文名称:
EcoRI, ADCF
产品组成:
组分 | 规格 |
BsmBI | 100 μl |
10×酶切Buffer | 1 ml |
识别位点:
5'...C G T C T C (N)₁↓...3'
3'...G C A G A G (N)₅↑...5'
建议反应条件:
1× 酶切Buffe; 37℃温育。
最适反应温度:
37℃
失活条件:
80℃ 温育 20 min。
活性定义:
1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中,55℃ 1 h内完全酶切 1 µg λDNA 所需的酶量。
反应时间:
可在 5~15 min 内完成反应
保存条件:
-20 ℃保存
用途:
质粒 DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的快速酶切。
使用方法:
DNA 快速酶切流程
① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则将会影响 BsmBI 酶活性;
② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴;
③ 55℃温育 15 min~1 h,一般推荐 5 U~10 U 酶 /μg 质粒 DNA、10 U~20 U 酶 /μg 基因组 DNA,温浴 1 h,如需过夜酶切反应,请将酶量调整 至 1U;
④ 80℃温育 20 min 即可使酶失活,停止反应,或者通过吸附柱或苯酚 / 氯仿纯化终止反应;
⑤反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%,避免酶中过多的甘油引起星号活性;
⑥限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同,反应体积越小,酶切反应抑制 效应越强;
⑦小体系推荐加样体系
不同 DNA 中的酶切位点数量:
甲基化修饰影响:
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