T7 RNA聚合酶
T7 RNA Polymerase
T7 RNA聚合酶，为噬菌体T7 DNA编码的酶，是一种高度特异识别T7启动子序列的DNA依赖的5'→3' RNA聚合酶，以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与DNA中一条链互补的RNA，简单快速获得大量的RNA分子。作为生物大分子，mRNA只能通过体外转录（IVT，in vitro transcription）的方法大规模合成，T7启动子是目前转录效率最高的启动子之一，因此采用T7 RNA聚合酶（T7 RNA Polymerase）进行体外转录可获得更多的合成产物。转录合成的RNA可用于诸如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射及体外翻译等多方面的下游应用。
货号：mrna-T7-1
产品名称：
T7 RNA聚合酶
英文名称：
T7 RNA Polymerase
纯度：
>95% pure (SDS-PAGE)
规格：
5Ku、50KU、500KU
状态：
Purified, Liquid
产品组分：
保存方法：
-20℃储存，避免反复冻融。
反应体系：
反应时间：
37℃孵育 1-2 h。
反应终止：
加入 2 µL 0.2 M EDTA (pH = 8.0@ 25℃)或者 75°C 加热 10 min。DNA 模板去除：可用 DNase I (2 U) 37℃处理 15 min。
反应抑制剂：
金属离子螯合剂、NaCl 和 KCl，该酶对高浓度 NaCl 或 KCl 不耐受，当其浓度超过 150 mM 时，活性受到显著抑制（活性约降低 50%）。
注意事项：
转录反应配制应在无 RNase 污染的环境中完成，操作过程建议佩戴手套。使用无核酸酶的水、吸头和反应管进行体系配制。
反应体系中 NTP 最适终浓度为 10 mM，实际用量应根据 NTP 原始浓度合理配制。
反应体系需要在室温下配制，避免在 4 °C时 DNA 与 10×HH T7 Buffer 发生反应产生沉淀。
模板 DNA 线性化不完全，可能降低转录产物产量和长度。
反应体系体积可根据实际需求按比例进行放大或缩小。
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