脱氧核糖核酸酶I

DNase I

DNase I（Deoxyribonuclease I，脱氧核糖核酸酶I）是一种可以将单链或双链DNA同等程度进行随机分解，生成具有5'-P末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA，其活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I能将双链DNA同时切断，使DNA片段化。 

货号：mrna-DI-1

产品名称：

脱氧核糖核酸酶I

英文名称：

DNase I

规格：

1KU、10KU、100KU

状态：

活性定义：

在 50 μL 反应体系中，37℃ 条件下，10 min内完全降解 1 μg pBR322 DNA 所需要的酶量定义为 1 个活性单位（U）。完全降解是指绝大多数的 DNA 片段降解成为四核苷酸或更短的核苷酸。

蛋白分子量：

DNase I 的分子量约为 31 kDa。

热失活：

加入终浓度为2.5mM的 EDTA，65℃加热10分钟，即可失活。 

储存缓冲液：

2 mM CaCl2，10 mM Tris-HCl (pH 7.6，25℃)，50% glycerol.

产品储存：

-20℃储存（避免反复冻融）。

产品应用：

1）制备不含DNA的RNA样品；

2）RT-PCR反应前RNA样品中，去除基因组DNA等可能的DNA污染；

3）体外T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的体外转录后去除DNA模板；

4）用于足迹法（Footprinting）分析DNA-蛋白质相互作用；

5）与DNA聚合酶I一起用于切口平移；

6）二价锰离子存在条件下，使DNA片段化，产生DNA随机片段文库；

7）细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

应用举例（仅建议，以实际试验为准）：

体外转录后去除 DNA 模板，操作步骤如下：

1）按照每 μg DNA 模板，加入 2U DNase I， 注意酶的用量可根据实际需要优化。

2）37℃孵育 15 分钟。   

3）加入终浓度为 2.5mM 的 EDTA，65℃加热 10 分钟终止反应。RNA 在加热时容易降解，可以用苯酚/氯仿抽提去除 DNase，乙醇沉淀 RNA。

注意事项：

• 如果需要对本酶进行稀释，建议使用酶储存缓冲液进行稀释；

• 在酶失活过程中，加入 EDTA 的最终浓度应为 5 mM，以保护 RNA 不被降解；

• 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存； 

• 金属离子螯合剂，0.1%SDS，DTT，巯基乙醇等对酶有抑制作用。

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