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牛痘病毒加帽酶

Vaccinia Capping Enzyme


牛痘病毒加帽酶将 7-甲基鸟苷帽结构(m7Gppp,Cap0)加到 RNA 的 5´ 末端。此结构提升mRNA的稳定性, 并对于后续转运和翻译都不可或缺。在真核生物中,该结构与 mRNA 的稳定、转运和翻译密切相关。使用酶促反应为 RNA 加帽是一种简单有效的方法,且帽结构与天然Cap 0 结构完全一致,能显著改善用于体外转录、转染和显微注射的 RNA 的稳定性和翻译能力。这种酶由两个亚基(D1 和D12)组成 (图 1a),D1 亚基执行 RNA 三磷酸酶和鸟苷转移酶的功能,D12 亚基执行鸟嘌呤甲基转移酶的功能,它们对于添加一个完整的 Cap 0 结构 m7Gppp5´N 都是必须的。


货号:mrna-VCE-1

产品名称:

牛痘病毒加帽酶

英文名称:

Vaccinia Capping Enzyme

纯度:

>95% pure (SDS-PAGE)

规格:

0.5KU、1KU、2KU、4KU

状态:

Purified, Liquid

缓冲液:

1x Capping Buffer包含: 0.5M Tris-HCl (pH 8.0), 50mM KCl, 10mM MgCl2, 10mM DTTS-adENosylmethionine


产品用途:

体内或体外翻译前 mRNA的加帽和 mRNA的 5’末端标记。

产品性质:

最适反应温度37℃

活性定义单位:  一个单位指在37℃下1小时内将10 pmol (α32P)GTP合并至80nt转录产物上所需要的酶量

产品特点:

加帽率可达95%,5’-Cap结构可有效促进mRNA在体内的表达。

注意事项: 

  • SAM:需事先计算好 SAM 的用量,在反应开始前把分装的 32 mM 的储备液稀释成 2 mM 的工作液。SAM 在 pH 7-8,37°C条件下不稳定,需要在反应开始之前新鲜配置。为避免 SAM 降解,该工作液需要保存于冰上。 

  • RNA:在加帽体系使用之前,应将体外转录反应产生的 RNA 进行纯化并溶解于 RNase-free 水中,不能将 RNA 溶解在 EDTA溶液或其他盐溶液中。 

  • RNA 二级结构:一些 RNA 转录本可能形成稳定的二级结构(同源二聚体和发卡结构),如二级结构发生在转录本的 5'端会影响加帽效率。在与加帽酶反应之前加热 RNA 可以去除转录产物 5´端的二级结构,如果转录产物的 5´端结构复杂,可以把加热时间延长至 10min,加帽反应时间可延长至 60min。 

  • Cap 0-和 Cap 1-mRNA:Cap 0-和 Cap 1-mRNA 之间的差异在 RNA 5'端紧邻帽结构的第一位核苷酸(N1)是否具有 2'-O-甲基。在高等真核细胞中,该甲基化是天然加帽过程的一部分,Cap 1 结构提高了 mRNA 的翻译效率。 


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