大包装蛋白原料 Poly(A)加尾酶/Poly(A) Polymerase

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Poly(A)加尾酶

Poly(A) Polymerase

Poly (A) 聚合酶是从重组菌株E. coli 中分离得到，此酶以ATP为底物进行催化，并以AMP的形式对RNA的3‘羟基端添加腺苷酸以形成Poly(A)尾部结构。Poly (A) 聚合酶具有很高的加尾效率，可以在 RNA 的 3´末端加入 20~200 个 A 碱基。聚腺苷酸化提高了 RNA在细胞中的稳定性，增强了转染或显微注射后 RNA 的表达效率。Poly(A)尾在某些应用中可作为第一链 cDNA 合成的引物结合位点，并可用于末端标记或定量 miRNA。

货号：mrna-Po-1

产品名称：

Poly (A) 聚合酶

英文名称：

Poly(A) Polymerase

纯度：

>95% pure

规格：

状态：

Purified, Liquid

反应缓冲液：

1x Reaction Buffer包含: 50mM Tris-HCl (pH 8.1), 250 mM NaCl, 10mM MgCl2

底物：

AdENosine-5’-Triphosphate(ATP 10 mM)

产品性质:

最适反应温度37℃

活性定义单位: 一个单位指20 μL反应体系中在37℃下10分钟内将1 nmol AMP合并至RNA上所需要的酶量

产品用途：

1. 用于RNA 3´末端标记；

2. 为RNA添加Poly(A)尾，用于克隆或亲和纯化。比如将miRNA添加Poly (A)，为cDNA合成提供oligo-dT引物结合位点；

3. 提高RNA在真核细胞中的翻译效率。

注意事项：

1. 该酶只能以 RNA 为底物；

2. 该酶将 AMP 添加到 RNA 的3´末端具有较高的选择性，并不会在所有 RNA 分子中添加相同长度的 Poly (A)；

3. 该酶需要 Mg2+等二价阳离子才具有活性；

4. RNA 加 A 尾长度受酶量、ATP 和反应时间等因素影响，不同的实验需要加 A 的量会有所不同，可通过控制反应时间及酶量来调整加 A 的长度，该酶在 37°C 反应 30 分钟时可加约30 个A 碱基，1 小时可加约 100 个 A 碱基；相同RNA 量及反应时间随酶量增加，加尾长度增大;相同RNA 量，加入5U 的酶量，随时间延长，加尾长度逐渐增大;

5. 该酶使用 M-MuLV 逆转录酶反应缓冲液，也可以进行反应；

6. EDTA 抑制该酶活性。若停止反应，可通过添加 EDTA 至终浓度 10mM，或直接对反应体系进行纯化；

7. 加尾结束后，在转染细胞或显微注射前，必须对 RNA 进行纯化，具体纯化方式见操作流程。

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